2003年，还在杭州艺校上学的叶祖新被选中出演《情断上海滩》而进入演艺圈。
2005年，参演古装电视剧《李小环与苗翠花》，饰演方世玉；同年，参演古装宫斗电视剧《大清后宫》，饰演少年道光帝。2006年参演家庭伦理电视剧《死去活来》，饰演樊涛；参演古装历史电视剧《皇上二大爷》，饰演赵金山。
2008年，参演战争历史电视剧《父亲的战争》，饰演彭龙。[9-10]
步步惊心饰演胤?
2011年，参演穿越电视剧《步步惊心》，饰演十阿哥胤誐 ；参演古装搞笑电视剧《怪侠欧阳德》，饰演淳贝勒 。
2012年，参演爱情励志电视剧《错点鸳鸯》，饰演冷刚 ；参演传奇抗战题材电视剧《五台山抗日传奇之女尼排》，饰演任松良；参演古装历史电视剧《薛平贵与王宝钏》，饰演叶公公 ；参演战争历史电视剧《向着胜利前进》，饰演何医生 ；参演古装武侠电视剧《新白发魔女传》，饰演辛龙子；在古装历史传奇电视剧《隋唐英雄》中饰演裴元庆。
犀利仁师饰范大同
2015年1月，参演《蜀山战纪之剑侠传奇》，饰演医术不凡的张馅饼 ；8月参演的抗日电视剧《铁在烧》在浙江、安徽卫视播出，饰演走上歧路悲剧收场的丁丑娃 ；9月主演的爱情喜剧电影《穷途》上映，饰演前往苗寨寻找药方的男主角邹孝宇 ；参演都市情感电视剧《爱情万万岁》，饰演为爱痴狂的90后新新人类金波 ；11月参演庄园爱情电视剧《我们的秘密》，饰演为情所苦的造型师罗仁 ；11月与黄世超、杨世瀚、张思帆共同演唱的电视剧《蜀山战纪》片尾曲《我就是我》单曲发布 。12月主演民国动作悬疑电视剧《左眼诡事》，饰演左眼能看到鬼魂的男主角尹明涯。
2016年，8月参演都市剧《一粒红尘》，饰演痴情的酒吧老板闵朗 。12月，主演的青春励志偶像剧《食全食美》开机，饰演男主角打假卫士吴佑 。
2017年3月31日，参演的悬疑电影《嫌疑人X的献身》在中国大陆上映，饰演破案的线索人物罗淼警官 。
2018年9月17日，参演的现代剧《橙红年代》播出，饰演正义青年贝小帅 。
2019年8月，参演电视剧《我们的西南联大》，饰演青年学生叶润名 。
2020年1月5日，与韩庚、王晓晨等人合作主演的都市情感剧《还没爱够》在江苏卫视播出 ；同年4月，参演的古代传奇剧《清平乐》播出，他在剧中饰演内侍总管张茂则 。
2013年11月11日，叶祖新和蒋欣在微博互动正式公布恋情。2015年3月12日，宣布和平分手[33-34] 。
2017年2月20日，有媒体报道叶祖新和女演员张佳宁疑似恋爱 。
2015年8月，叶祖新参加“韩红爱心百人援贵”大型医疗援助公益行动，到贵州省罗甸县边阳镇担任志愿者。
2021年7月，通过韩红爱心慈善基金会向河南暴雨灾区捐款 。
