1985年，周慧敏参加了新秀歌唱大赛 。1986年，她参加了“香港电台业余DJ大赛”，并获得了亚军。1987年，周慧敏加入香港电台第二台担任DJ，与歌手黄凯芹搭档主持音乐节目《青春交响曲》 。
1988年，周慧敏加入TVB，担任音乐节目《劲歌金曲》的主持人；同年8月25日，与林子祥、郑裕玲共同主演的爱情喜剧片《三人世界》上映，该片是周慧敏的电影处女作，她凭借该片获得了第8届香港电影金像奖最佳新演员提名 ；11月1日，推出个人首张同名EP唱片《周慧敏》，该唱片销量获得“金唱片”成绩 。
1989年1月，获得香港电台第11届十大中文金曲最有前途新人奖优异奖；同年，担任香港电台电视部时事节目《摩登时代》的主持人 。
1990年，与刘锡明、罗嘉良等联袂主演的古装武侠剧《乌金血剑》播出，该片是周慧敏出演的个人首部电视剧，她在剧中饰演活泼爽朗，好胜好强的“唐剑儿” ；同年，推出个人首张音乐专辑《Vivian》，该专辑获得了白金销量 。
1992年3月19日，与黎明、郑则仕等合作主演的喜剧电影《痴情快婿》上映，她在片中饰演爱上反黑组警员的黑社会老大之女“马青霞” ；6月1日，推出音乐专辑《EndlessDream》，该专辑收录包括《如果你知我苦衷》在内的10首歌曲；10月5日，与郑少秋、刘青云、刘松仁等共同主演的时装商战剧《大时代》首播，周慧敏扮演为人悭吝，却煮得一手好菜的“阮梅” ；随后，周慧敏签约台湾福茂唱片，进军台湾市场，并于11月6日发行个人首张普通话唱片《流言》，该唱片总销量冲破30万张 ；同年，周慧敏被选为商业电台十大健康形象艺人。
1993年1月，周慧敏获得了日本NHK最受欢迎外国女歌手奖 ；1月7日，发行粤语专辑《冬日浪漫》，该专辑包括同名主打歌在内的11首歌曲；2月26日，出演的喜剧电影《风尘三侠》上映；9月，发行粤语专辑《最爱》 ；同年，获得劲爆女歌手大赏铜奖 。
1994年，周慧敏先是在台湾举行了4场巡回演唱会，接着又在香港举行了4场“周慧敏美的化身94”演唱会；同年4月1日，发行粤语专辑《成长》；11月26日，与邵仲衡、郭耀明联袂主演的爱情电影《我爱法拉利》上映，她在片中饰演一直梦想成为歌手的“周小敏” 。
1995年5月15日，发行粤语专辑《多一点爱恋》，该专辑包括同名主打歌在内的12首歌曲；11月13日，与陈锦鸿、梁艺龄、谭耀文等联合主演的民国爱情剧《刀马旦》开播，她在剧中饰演为追查藏宝图下落而潜入戏班的南方政府特务“沈玉茹” 。
1996年5月2日，与黄秋生、黄子华、李婉华等共同主演的喜剧电影《金装香蕉俱乐部》上映 ；6月19日，发行了粤语专辑《热·敏》，该专辑由周慧敏亲自担任监制；10月8日，推出普通话专辑《时间》，该专辑包括同名主打歌在内的10首歌曲。
1997年下半年，周慧敏先后在美国大西洋城和拉斯维加斯各举行了一场告别演唱会，随后她宣布退出娱乐圈 。2005年5月，周慧敏为宠物猫撰写的成长日记《我的猫儿子周慧豹》出版 。
2010年8月26日，与吴君如领衔主演的爱情电影《得闲炒饭》上映，她在片中饰演因一夜情怀孕的银行职员“Anita” 。
2011年3月19日，为庆祝入行25周年，周慧敏在香港红馆举行“DeepV.25演唱会” ；3月28日，推出EP专辑《盆栽》；11月4日，周慧敏获得了“十大杰出衣着人士”奖 。
2012年3月24日，周慧敏现身黄凯芹“truecolors25周年”演唱会担任嘉宾 ；5月19日，周慧敏在澳门金光综艺馆举行“JourneyOfLove周慧敏世界巡回演唱会” ；10月27日，“JourneyOfLove周慧敏世界巡回演唱会”广州站开幕 。
2014年8月15日，与宋芸桦、赖雅妍、蓝心湄等联袂主演的爱情喜剧片《等一个人咖啡》上映，周慧敏在片中扮演美丽优雅，不食人间烟火的老板娘 ；12月18日，推出个人首张福音专辑《HIM》，专辑收录了10首歌曲，都由周慧敏亲自监制、创作 。
2015年3月21，应林以诺牧师邀请，周慧敏参加了“YeahShow2015音乐布道会”，并演唱了福音歌曲《肋骨》 。2017年1月28日，周慧敏参加了2017江苏卫视春节联欢晚会，与古巨基合唱了歌曲《许愿》 。
2018年1月26日，为庆祝入行30周年，周慧敏在香港红馆举行“一万天荒爱未老·周慧敏30周年演唱会” 。2019年8月10日，“一万天荒爱未老·周慧敏30周年演唱会”台北站开唱 ；11月9日，“一万天荒爱未老·周慧敏30周年演唱会”南宁站开唱 。
父母
周慧敏是个遗腹子，她父亲在她出生前就因心脏病去世了，她是与母亲相依为命长大的 。2015年9月，其母在睡梦中安详过世，享寿91岁 。
感情
1986年，周慧敏与Radiers乐队的主唱陈德彰相恋。1991年，陈德彰对外宣布已和周慧敏分手。
1989年，周慧敏与媒体人倪震因参加节目而相识，后来联系渐多发展为恋人关系。1993年，两人协议分手 。1996年两人复合。1997年，周慧敏宣布退出娱乐圈，和倪震移居加拿大温哥华。2004年，两人返回香港定居。2008年12月7日凌晨，香港媒体在中环的一家酒吧内拍到了倪震和一个年轻女孩的热吻照片；12月11日，周慧敏与倪震同时电告香港各大媒体，宣布分手，“做回朋友”；12月18日，倪震发表声明，宣布已和周慧敏注册结婚 。2009年1月5日，两人举办婚宴 。
爱好
周慧敏于1997年淡出娱乐圈后学会了理发，并醉心于画画，写作及美式台球，她是香港美式台球协会会员，曾经代表出赛夺取女子组第三名 。2001年，在水溶剂绘画展中，周慧敏以画作《新疆老翁》获得了“视艺新纪元奖” 。
宗教信仰
周慧敏于2009年开始参加教会礼拜，并于2010年复活节受洗成为基督徒 。
宠物
2003年，当时还是恋人的倪震买回了一只豹猫，周慧敏视其为“儿子”，并取名周慧豹 。
周慧敏
2000年2月13日，周慧敏参与“保护遗弃动物协会”募捐活动，市民付出40元便可跟她合照、签名及握手等 。
2003年，周慧敏应邀担任保护非烟民协会的首任大使，并撰写公开信给香港特首董建华要求正视二手烟对非烟民之毒害。
2004年5月13日，周慧敏带了大量猫狗的食物，驾车到元朗的保护遗弃动物协会，探望一群被收留的流浪猫、狗 。
2005年1月6日，作为“无烟工作间领先企业大使”的周慧敏，担任“全港无烟工作间领先大奖”颁奖礼颁奖嘉宾，并提倡政府应该实施食肆全面禁烟 ；9月24日，受邀担任保良局“地区安老服务”开幕嘉宾 ；11月26日，出席在奥海城举行的“奥海城童声童话丹麦圣诞亮灯夜”活动 ；同年，将《我的猫儿子周慧豹》一书的版税全数捐给SAA作营运基金之用，并为SAA作探访宣传活动。
2006年2月18日，出席某品牌“一瞬一生成就美丽慈善化妆马拉松”活动 ；5月25日到27日，周慧敏连续举行了三场题为“BACKFORLOVE”的演唱会，目的是给“香港非牟利兽医诊所”的建立筹款，演唱会后，她捐出了150万元的全部所得 ；10月12日，周慧敏应邀担任香港癌症基金会的粉红大使，并出席香港癌症基金会粉红革命活动，呼吁妇女应明白及早发现乳癌的重要性 ；11月30日，出席又一城的圣诞树亮灯仪式，并拍卖镶有2千粒水晶石的蝴蝶结，所得的善款捐赠给“愿望成真基金”，帮助患重病的儿童达成愿望 。
2007年5月，周慧敏跟随一个慈善团体探访全球最贫困的国家之一的老挝，还参与“助养儿童计划”，成为当地三位儿童的“母亲” ；7月22日，出席某品牌“慈善化妆马拉松”活动，周慧敏即席替两位长者化妆打扮，又自掏腰包捐出五百元，买两盒朱古力筹款 ；10月14日，周慧敏以“粉红大使”身份出席“粉红革命”活动，呼吁妇女关注乳房健康 。
2008年1月12日，周慧敏以“环保大使”身份出席“计算机回收计划揭幕日” ；2月16日，出席保护遗弃动物协会研讨会 ；3月1日，参加了在上海举行的“爱我中华2008新娱乐慈善群星会”，获颁“2008最具影响力慈善之星”称号 ；3月17日，周慧敏以“乐施会中国发展基金”大使身份，前往云南省禄劝县之贫穷乡村作亲善探访 ；3月，获控烟办公室之邀为推广控烟短片担任主持工作；5月25日，以乐施大使身份义卖乐施米，为四川地震的灾民筹款 ；6月1日，参与“演艺界512关爱行动”并义唱为四川地震灾民筹款 ；6月7日，以乐施大使身份出席乐施商品开幕礼并捐出私人物品义卖，推动该会扶贫救灾工作；10月9日，周慧敏出席“粉红革命”记者会 ；11月9日，出席某化妆品牌举办的慈善义卖活动，善款捐赠给UNICEF中国女童教育基金 ；11月13日，以“中国爱滋病防治行动关爱大使”身份出席“童心同行爱之夜”记者招待会 ；11月29日，以“苗圃行动爱心大使”身份出席“爱心汤罐设计比赛”颁奖典礼，代表苗圃行动接收10万5千元善款，作为重建四川之用 ；11月，黎明的慈善演唱会在香港举行，周慧敏作为特别嘉宾出席 。
2009年2月3日，以“饥馑助养大使”身份出席“饥馑三十2009”记者会，之后到尼泊尔探访5天并助养四名孩子 ；10月7日，周慧敏在香港以“粉红大使”身份出席香港癌症基金会的“粉红革命”活动，提醒妇女及早发现乳癌的重要 ；11月8日，2009年东亚运动会期间，周慧敏以愿望成真基金大使身份出席“首届单车慈善车路挑战赛”颁奖礼 12月26日，出席电影《秋田犬八千》的宣传活动，以宣传非牟利兽医诊所 。
2010年3月3日，以中国艾滋病防治行动关爱大使身份出席活动 ；3月25日，以“艾滋病关爱大使”的身份，与中国艾滋病防治行动香港委员会联席主席梁智鸿、副主席李丽娟等人前往甘肃清水县金集镇主持了中国艾滋病防治行动香港委员会援建的金集镇中心卫生院住院大楼落成典礼，并探访了一些受艾滋病影响的家庭 ；4月25日，获得了“2009真维斯娱乐大典”慈善类·年度慈善人物奖 ；4月26日，参加在香港红馆举行的赈灾汇演晚会，为青海玉树地震筹款 。
2011年3月，周慧敏将EP《盆栽》和海报义卖的收益，扣除成本后捐给日本地震及海啸灾民 ；3月26日晚，周慧敏亮相上海某会馆，为当晚举行的开业典礼暨关注日本、云南灾区慈善晚会助力，并拿出了自己从艺25周年演唱会麦克风和随身佩带腕表进行拍卖，分别拍得10万元及20万元善款。中国爱心工作委员会主席龙宇翔为周慧敏颁发了年度爱心大使奖 ；5月7日，出席“郑兆良与十字路口筹款晚会” ；10月初，周慧敏在闻悉东非遭遇60年来最严峻的粮荒，受灾人数逾千万，当中还包括逾200万名脆弱的儿童后，与郑秀文拍摄短片，呼吁大众关注这次粮荒 ；11月7日晚，以宣明会助养者身分主持“星光花园圣诞灯饰汇演”亮灯仪式 ；11月30日，出席香港爱滋病基金会20周年慈善暨感恩晚宴，现场还特别演唱歌曲为基金会筹款 。
2012年8月2日，为宣明会主办的“旧书回收义卖大行动2012”开幕礼担任主礼嘉宾，并现场捐出个人著作《我的猫儿子周慧豹》，呼吁买书筹款助陕西学童兴建学校 。
2013年6月13日，应邀出席某慈善筹款晚宴活动 。2015年9月28日，周慧敏出席“60年代的光芒AGoGoDance慈善演唱会” 。
周慧敏是20世纪90年代香港流行乐坛真正具有代表性的女歌手之一 。她的身材很好，雍容华贵、漂亮、有气质 。她不仅是美女，更是才情与美貌匹敌的才女。她的形象是20世纪九十年代香港男人心中一个清纯的梦，盈盈美眸，柔柔长发，声若莺燕，无论从哪个角度看都完美无缺 。（《淑媛》、演员谭耀文、时光网评）
周慧敏温文优雅的形象及清新脱俗的气质一直深入民心，被外界诩以“玉女掌门人”的称号 。在电视剧《刀马旦》中，周慧敏饰演的沈菊仙有着不俗的扮相，能感到清丽美感 。（金羊网-羊城晚报、澎湃新闻评）
