何赛飞，1963年出生于浙江省舟山市岱山县，家里有三个女孩，她排行第二。1967年何赛飞的父母离异，她跟随父亲生活。
在她十六岁的时候，越剧电影《红楼梦》、《碧玉簪》在农村放映，何赛飞看完后常回家给父亲学上几段，原本做文化工作的父亲看到她乐感挺不错就支持她去报考越剧团。
1982年何赛飞考入浙江岱山越剧团。1983年调入浙江小百花越剧团。 1985年何赛飞从浙江艺术学校戏曲表演专业毕业。
1991年，参演张艺谋执导的电影《大红灯笼高高挂》，饰演梅珊一角。1994年，主演了李少红执导的电影《红粉》和陈凯歌执导的电影《风月》。在《红粉》中，她饰演青楼女子小萼，演得不温不火、恰当好处， 这部影片也进一步提高了她的知名度。
1999年主演电视剧《情迷海上花》。
2000年，她接拍了20集电视剧《爱是阳光》，并在剧中任女主角。
2001年，在郭宝昌导演的电视剧《大宅门》中饰演名妓杨九红，凭借在这部电视剧中的表现，何赛飞获得中央电视台美菱杯“观众最喜爱的十佳女演员奖”。
2002年，参与主演电视剧《孝庄秘史》，饰演皇太极最宠爱的宸妃海兰珠 。2003年，参演郭宝昌执导的电视剧《大宅门第二部》，再度饰演杨九红 。
2004年，主演电视剧《月影风荷》，饰演季文月一角 。2005年主演电视剧《血色残阳》。
2007年11月，与汤唯、梁朝伟合作出演李安导演的电影《色戒》，饰演萧太太一角。
2007年12月，何赛飞到宁波出演滑稽戏《太太万岁》；同年主演电视剧《江湖兄弟》，剧中何赛飞与施羽出演一对在江湖中飘泊的恋人 。
2008年，主演电视剧《祈望》和《纸醉金迷》。
2009年，主演电视剧《娘家的故事》和《侬本多情》。
2010年，主演电视剧《老马家的幸福往事》 。
2011年，参与主演电视剧《新女婿时代》和《后宫》。
2012年，出演电视剧《女人泪》和《唐宫燕》，饰演唐中宗李显的妻子韦皇后 。
2013年，与佟丽娅、杨烁合作出演电视剧《刀客家族的女人》 ；
2013年4月，何赛飞主演的电视剧《那金花和她的女婿》在全国各大卫视黄金档播出。 2015年，加盟主演抗战题材电影《那些女人》，饰演水芹娘[17-18] ；10月，主演的喜剧《二毛驴从军记》在横店杀青 。
2016年6月，主演电视剧《老妈的桃花运》，饰演丁香香。
2016年12月，主演情感题材电视剧《最亲最爱的人》，饰演甄婕的生母张锦屏 。
2017年春晚，表演戏曲《薪火相传》（天上掉下个林妹妹）[21-22]
2018年9月28日，凭借电影《那些女人》获得第16届平壤国际电影节最佳女主角奖 。
